Denis Pushilin sinh ngày 9 tháng 5 năm 1981[1] tại thành phố Makeevka, tỉnh Donetsk, CHXHCN Xô viết Ukraina.[2][3] Bố mẹ ông, ông Vladimir Pushilin và bà Valentina Khasanova, đều từng làm việc cho Nhà máy luyện kim Makiivka. Ông từng học tại Trường trung học cơ sở số 12 Makeevka, sau đó tiếp tục theo học tại Học viện Xây dựng và Kiến trúc Quốc gia Donbass.

Từ năm 1999 tới năm 2000, ông từng phục vụ trong một tiểu đoàn tại bán đảo Krym thuộc Vệ binh quốc gia Ukraina.[4][5]

Năm 2002, ông làm việc tại một công ty thương mại có tên là "Solodke Zhyttya".[4][5]